Применяемые при вивисекциях на лягушке оперативные приемы описаны при изложении соответствующих опытов. Обычно употребляемые инструменты изображены на рисунке 3.
Для примера остановимся на вивисекции, связанной с введением канюли в бедренную артерию собаки.
Животное привязывают на вивисекционном столе брюхом кверху. Применяют морфинно-эфирно-хлороформенный наркоз. Остригают шерсть в области паха. Проводят здесь скальпелем
Артерию перевязывают в дистальном отделе.Загрузка. Пожалуйста, подождите...
Приклеивать бумагу непосредственно к барабану нельзя, так как поверхность его при соскабливании гуммиарабика делается неровной и он становится непригодным к пользованию.
6. Чтобы закоптить бумагу, проще всего пользоваться копотью керосиновой лампы с плоским фитилем, над которой медленно вращают руками барабан с бумагой. Для закопчения большой ленты применяют приспособление. Оно состоит из двух барабанов, установленных горизонтально на вертикальном штативе, по которому верхний из них может перемещаться.
Форма и размеры их разнообразны и зависят от условий раздражения.
Простые электроды (рис. 33) представляют собой две медные или серебряные проволоки диаметром 0,5—1 мм. Они изолированы друг от друга и укреплены менделеевской замазкой в стеклянной трубке. Выступающие из последней проволоки на одном конце припаяны к проводам, идущим к вторичной обмотке индукционного аппарата, а на другом оголены и оканчиваются свободно.
Оно заключается в том, что у катода скопляются катионы, несущие положительный заряд, а в области анода — отрицательно заряженные анионы. Накопление ионов на полюсах вызывает понижение электродвижущей силы постоянного тока.
Во избежание поляризации применяют специальные электроды. При их изготовлении пользуются тем, что металлы в насыщенных растворах своих солей не дают поляризации.
Неполяризующиеся цинковые электроды, Дюбуа-Реймона (рис.
3.. Смеситель с кровью погружают в стаканчик с 2% раствором NaCl, который набирают точно до метки «101». При этом прибор лучше держать вертикально.
4. Помещают смеситель в горизонтальное положение (это предупреждает вытекание крови из капилляра), снимают резиновую трубку, зажимают большим и средним пальцами концы-; смесителя и встряхивают его в течение 4—5 минут. Перемешиванию крови в расширении смесителя способствует находящийся в нем стеклянный шарик.
Этим избегают повторного счета. Эритроцитов, большая часть которых лежит вне квадрата, не считают.
Дойдя до малого квадрата на правом краю первого ряда, переходят к правому малому квадрату второго ряда и продолжают счет, передвигая теперь сетку справа налево и т. д.
Найденное в каждом квадрате число эритроцитов отмечают в протоколе, который лучше всего оформить в виде сетки из больших и малых квадратов.
Она указывает, что объем ампуло-образного расширения с белым шариком внутри только в 10 раз больше объема капилляра.
Так как капилляр широкий, то его держат при взятии крови из пальца горизонтально. Капля крови должна быть крупной, поэтому укол пальца следует произвести поглубже.
Для разведения крови при подсчете лейкоцитов применяется следующий состав:
1) ледяная уксусная кислота— 3,0 мл;
2) 1% водный раствор генцианвиолета—3,0 мл;
3) дистиллированная вода—300 мл.
Выполнение работы ознакомит студентов с определением РОЭ при,помощи аппарата Панченкова.
Аппарат Панченкова. Аппарат Панченкова (рис. 46) представляет собой металлический штатив, в котором можно разместить 30 пипеток. Своим заостренным концом они ставятся на резиновые трубки и удерживаются сверху металлической планкой в вертикальном положении. Цифровые обозначения на планках помогают установить пипетки строго по вертикали.
5. Глазным пинцетом берут нитку и подводят ее под сердце на границе между предсердиями и желудочком (по атрио-вентрикулярной борозде). Осторожно перевязывают ниткой сердечную уздечку, которая находится между задней поверхностью желудочка и сердечной сумкой. Перерезают уздечку Ножницами дистальнее места перевязки. После этого, приподняв сердце за-, нитку, можно рассмотреть его с дорзальной стороны.
6.
3. В воронку наливают воду, слегка подкрашенную метиленовой синькой. Вода наполняет предсердие, желудочек и, выйдя по легочной артерии в вертикальную трубку, устанавливается в ней на том же уровне, что и в воронке (закон сообщающихся сосудов).
4. Сжимают руками стенку правого желудочка и затем отпускают ее.
Отмечают, что жидкость, поднявшись в вертикальной трубке до определенного уровня, остается на нем и после расслабления стенки желудочка.
Вода наполняет левый желудочек сердца, повышая в нем давление. Створки клапана поднимаются и закрывают атриовентрикулярное отверстие. Вода проходит через аорту в стеклянную трубку. Как только вода опустится ниже верхушки желудочка, образуется сифон, и она выливается из желудочка. В результате резкого падения давления в полости желудочка створки клапана опускаются и атриовентрикулярное отверстие открывается.
Через этот отросток можно, повышая или понижая давление воздуха в системе, регулировать степень прижатия пелота кардиографа к грудной клетке.
Ход опыта. 1. При помощи тесьмы подвязывают кардиограф к грудной клетке испытуемого (рис. 60). Регистрирующий рычажок капсулы Марея приводят в соприкосновение с закопченной поверхностью барабана электрокимографа (кимографа).
2. Собирают установку для графической регистрации времени.
Экстрасистола и компенсаторная пауза-Приборы, материалы и объекты исследования. Кардиографический пинцет Марея, индукционный санный аппарат, два аккумулятора, игольчатый ртутный ключ, обычный электроключ, два электроотметчика, кимограф с медленно-вращающимся барабаном, три штатива, кольцо и три держателя к штативу,-ножницы, пинцет, зонд, дощечка, булавки, лягушка.
Задача. Сердечная мышца обладает рядом характерных-физиологических особенностей, отличающих ее от скелетных поперечно-полосатых мышц.
Подготовка опыта. 1. Обезглавленную лягушку с разрушенным спинным мозгом прикалывают на дощечке брюшком кверху. Вскрывают грудную полость, продолжая разрез кожи до переднего края нижней челюсти. Обнажают сердце, удаляя перикард.
2. Переднюю лапку лягушки отодвигают в сторону от туловища, фиксируя ее в таком положении булавкой. Удаляют мышцы и фасции, прикрывающие блуждающий нерв с вентральной стороны от угла нижней челюсти к сердцу.
4. У лягушки № 1:
а) раздражают внутренностный нерв; наблюдают рефлекторную остановку сердца;
б) перерезают правый п. vagosympathicus; раздражают внутренностный нерв; наблюдают рефлекторную остановку сердца;
в) перерезают левый п. vagosympathicus; раздражают внутренностный нерв; сердце продолжает сокращаться.
5. У лягушки № 2:
а) разрушают продолговатый мозг; для этого спинной мозг перерезают скальпелем под продолговатым и удаляют последний прочь;
б) раздражают внутренностный нерв; сердце продолжает сокращаться.
работу 11). Тщательно отпрепаровывают обе дуги аорты и, подведя под них нитки, перевязывают, отступив как можно дальше от сердца. Под одну из дуг (обычно левую) подводят еще нитку.
2. Острыми глазными ножницами надрезают стенку левой дуги аорты и, оттянув край разреза пинцетом или крючком, вводят в сосуд канюлю с раствором Рингера и осторожно продвигают ее в полость желудочка. Если канюля встречает препятствие (клапаны артериального конуса), то ее немного оттягивают назад, не вынимая из аорты, и затем повторно вдвигают, слегка вращая, пока она не войдет в полость желудочка.
Задача. Задача заключается в том, чтобы измерить давление крови в сосуде (прямой метод) и установить, что величина его зависит от трех факторов: 1) массы крови, имеющейся в сосудистой системе, 2) притока крови в артерии (работа сердца) и 3) оттока крови из артерий (сопротивление в периферических сосудах).
Подготовка опыта. 1. Обезглавленную лягушку (спинной мозг сохранить!) прикалывают на дощечке брюшком кверху.
Практические указания. 1. Пропуская воздух через газовые часы, его* надо выдавить из мешка, свертывая последний по направлению к выпускной' трубке.
2. Следует пропускать воздух из мешка в часы при незначительной скорости вращения их барабана.
Работа 35. Разница в содержании С02 во вдыхаемом и выдыхаемом воздухе
Приборы, материалы и объекты исследования. Склянка с трубками, гиря* в 10 кг, свежепрофильтрованный насыщенный раствор Ва(ОН)2: Объектами исследования являются сами участники занятия.
При дыхании через свободный отросток тройника Б вентильная склянка А пропу* екает вдыхаемый воздух, а, вентильная склянка В—выдыхаемый воздух.
Склянки наполнены на 2/з своего объема свежеприготовленным насыщенным раствором Ва(ОН)2 (барйч товая вода).
Ход опыта. 1. Испытуемый дышит через тройник Б, Наблюдают помутнение раствора в склянке В вследствие образования углекислого бария (ВаСОз). Это служит показателем того, что выдыхаемый воздух содержит С02.
Воронка Ю щ е н к ®, шприц или отсасывающий резиновый баллон, резиновые трубки с просветом >в 1 мм, два зажима Мора, две градуированные пробирки, укрепленная в штативе стеклянная капиллярная трубка для вискозиметрии, секундомер, •фильтровальная бумага, два стаканчика, дистиллированная вода, 0,2% раствор НС1, печенье, кусок лимона или клюква.
Объектами исследования служат участники занятия.
Задача. Слюноотделение у человека характеризуется рядом •особенностей.
Предлагаемая работа позволит наблюдать переваривание белков, жиров и углеводов ферментами поджелудочного сока.
Переваривание белков. 1. Берут три пробирки и наливают:
В пробирку № 1—2 мл активированного энтерокиназой
поджелудочного сока; » № 2—2 мл неактивированного сока из протока
поджелудочной железы » № 3—2 мл активированного энтерокиназой и
прокипяченного поджелудочного сока
В каждую пробирку кладут по кусочку фибрина и помещают в водяную баню, нагретую до 38—40°С.
Самое сильное расщепление жира, а следовательно, и наибольшая активность фермента липазы обнаружены в пробирке № 1, где образовалось наибольшее количество жирных кислот. Причина этого в активировании липазы желчью.
Переваривание углеводов. 1. Берут три пробирки и вливают в них:
В пробирку № 1—1 мл поджелудочного сока, 2 мл крахмального клейстера и 4 мл воды; » № 2—1 мл прокипяченного поджелудочного сока, 2 мл крахмального клейстера и 4 мл воды; » № 3—1 мл поджелудочного сока, немного сырого крахмала в порошке и 4 мл воды.
Измеряют объем воздуха в бюретке после поглощения Ог пирогаллолом.
6. Высчитывают объемы СОг и Ог, содержавшиеся во взятой для анализа пробе воздуха. Обозначив через а объем пробы воздуха, через б — объем его после поглощения СОг и через в — объем после поглощения Ог, получают:
Расчет газообмена. 1. При расчете газообмена объем выдохнутого воздуха приводится к так Называемому нормальному объему, т.
К крышке колокола D приделана трубка п; служащая для прохождения медных электродов, которые погружаются в гильзу. Концы
электродов ее соединены тонкой платиновой проволокой, которая накаляется при прохождении электрического тока и поджигает смесь в гильзе А. Трубка п имеет боковой отвод с краном Е.
Медный цилиндр калориметра накрывается крышкой с двумя отверстиями для прохождения трубки я и термометра, при помощи которого измеряют температуру воды в калориметре.
Задача. Если на мышцу нанести два быстро следующих друг за другом одиночных раздражения, причем второе раньше, чем закончится реакция на первое, то возникает суммированное сокращение, которое оказывается по высоте больше составляющих его одиночных сокращений.
Задачей работы является получение кривой суммации двух одиночных мышечных сокращений.
Подготовка опыта. Запись сокращений мышцы ведут на быстро вращающемся барабане.
109, внизу).
4. Вслед за этим включают в первичную цепь электромагнитный прерыватель — молоточек индукционного аппарата — и записывают кривую гладкого, или истинного, тетануса.
Практическое., указание. Для получения тетанического сокращения мышцы удобно воспользоваться электроимпульсатором ЭИ-1.
Работа 61. Зависимость силы сокращения скелетной мышцы от силы раздражения
Приборы, материалы и объекты исследования.
Для этого каждый раз сближают катушки на 5 мм.
Замыкательные удары исключают. Для этого перед замыканием ртутного ключа в первичной цепи замыкают ключ во вторичной цепи.
5. Наблюдают постепенное увеличение силы сокращения мышцы (субмаксимальное сокращение) до определенной вели-' чины, после чего высота кривой остается постоянной, несмотря на дальнейшее увеличение силы раздражения (максимальное сокращение, рис.
Пользуясь формулой, следует определить работу мышцы при различных нагрузках.
Подготовка опыта. 1. Приготовляют препарат икроножной мышцы, который укрепляют в миографе. Под рычажок подводят подпорку и подвешивают на него груз, который растягивает мышцу лишь в момент ее сокращения, когда рычажок поднимается над подпоркой.
2. Монтируют обычную установку для раздражения мышцы размыкательными индукционными ударами.
На одной из сторон находят пограничный симпатичен ский ствол, который вблизи седалищного сплетения отпрепаро-вывают от окружающих тканей (рис. 116). На уровне шестого симпатического узла ствол перевязывают ниткой и впереди от нее перерезают.
2. Перерезают седалищное сплетение кпереди от подходящих соединительных веточек (г. communicantes).
3. Обнажают бедренную артерию, отпрепаровывая от седалищного нерва, и накладывают на нее клемм-пинцет Диффенбаха.
Работа 80. Суммация возбуждений в спинном мозгу
Приборы, материалы и объекты исследования. Штатив с зажимом и пробкой, булавка, аккумулятор, индукционный аппарат, электроключ, провода, ножницы, пинцет, лягушка.
Задача. При нанесении подпороговых раздражений в частом ритме происходит их суммация и наступает рефлекторная реакция. Это свойство нервной системы впервые было описано И. М. Сеченовым (1863).
Поэтому поступающие в центральную нервную систему импульсы вызывают не ту реакцию, которая бывает в обычных условиях, а реакцию, характерную для доминирующего центра.
Задачей работы является наблюдение некоторых доминант у лягушки и у собаки.
Доминанта в центре потирательного рефлекса. Доминанту в центре потирательного рефлекса у лягушки вызывают, раздражая индукционным током кожный нерв бедра. После этого раздражение какого-либо рецептивного поля, обычно не вызывающее потирательного рефлекса, будет его вызывать.
Наблюдение чувствительного и двигательного параличей после перерезки задних и передних корешков. 1. Занаркотизирован-ную лягушку прикалывают на дощечке спиной кверху.
Вскрывают позвоночник и обнажают спинной мозг (см. работу 84). Находят 7, 8 и 9-й корешки
2. Приподнимают стеклянным крючком левые задние спинномозговые корешки (на них имеются утолщения — спинномозговые узлы) и перерезают острыми ножницами.
Чтобы не перепутать и не порвать ;орешки, рекомендуется взять разноцветные нитки и свободные концы их псЛе перевязки обрезать вблизи корешков (на 4—5 см).
ПКПК — периферический конец переднего корешка; ЦКПК— центральный конец переднего корешка; ПКЗК— периферический конец заднего корешка; ЦКЗК — центральный конец заднего корешка; плюсом обозначено наличие, а минусом—отсутствие двигательной реакции при раздражении током периферических и центральных концов корешков.
) и смазывают ею основание воронки. Приклеивают последнюю к коже щеки в том месте, где выведен проток околоушной железы. Подвешивают к воронке стеклянный цилиндрик для собирания слюны. s
Ход опыта. 1. Отмечают, что при отсутствии каких-либо раздражителей, связанных с пищей, слюноотделения из околоушной железы не происходит.
2. Показывают собаке хлеб, поддразнивают им. Наблюдают отделение слюны из околоушной железы (натуральный условный рефлекс на вид пищи).
Ниже мы описываем более упрощенную методику проведения опытов. Она примерно соответствует методике первых лет работы И. П. Павлова по условным рефлексам, когда экспериментатор находился в одной комнате с подопытным животным.
Образование условного слюноотделительного пищевого рефлекса на звук звонка. 1. Помещают собаку в станок и приклеивают к коже щеки вокруг выведенного протока околоушной железы воронку с цилиндриком для собирания слюны (см.
К действию условного раздражителя (в нашем случае — звучание звонка) присоединяют другой раздражитель, например свет электрической лампочки. Этот посторонний раздражитель тормозит условный пищевой рефлекс (внешнее, или безусловное, торможение). ,
2. Условный раздражитель (в нашем случае — звук звонка) многократно не подкрепляют безусловным. В результате звонок теряет свое положительное значение, что выражается в отсутствии слюноотделения в момент его действия (внутреннее, или условное, торможение).
Задача. Условные оборонительные рефлексы вырабатываются на различные факторы, предшествующие вредно действующим
раздражителям. Этот вид условных рефлексов имеет огромное биологическое значение, помогая животному избежать опасности.
Задача работы заключается в выработке и угашении условного двигательного (оборонительного) рефлекса на стук метронома.
2. Собирают обычную установку для раздражения индукционным током.
Изменение фосфена под влиянием адекватного раздражителя (света) используют для критики закона специфической энергии органов чувств И. Мюллера.
Приборы, материалы и объекты исследования. Разновес на 1 кг, подставка для гирек, повязка на глаза, звуковой генератор типа ЗГ-10, динамический громкоговоритель.
Объектами исследования являются сами участники занятия.
Задача. По закону Вебера — Фехнера прибавка величины раздражения, необходимая для заметного усиления ощущения, находится в зависимости от интенсивности действовавшего раздражения, и их отношение представляет собой постоянную величину:
Работа 94.
2. Испытуемый смотрит на зажженную электрическую лампу через синее (кобальтовое) стекло. Отмечает, что нити накаливания в ней окрашены в синий и красный цвета.
Астигматизм. Испытуемый, страдающий астигматизмом, смотрит одним глазом с расстояния наилучшего зрения на диск, на котором близко друг от друга нарисованы окружности (рис. 150). Отмечает, что ему видны лишь отдельные секторы диска, остальная его площадь кажется расплывчатой.
Наблюдают сужение зрачка не только в правом, но и в левом глазу (содружественная реакция).
4. Заставляют испытуемого фиксировать глаза на карандаше, до которого 1—0,5 м. Затем карандаш быстро приближают к глазам. Происходит сведение зрительных осей (конвергенция) и сужение зрачков.
Приборы, материалы и объекты исследования. Вертушка, цветные кружки разной величины с радиальными разрезами, серый экран.
. Во всех случаях получают белый (сероватый) цвет.
Величину сегментов, окрашенных в дополнительные цвета, подбирают эмпирическим путем.
5. Проверяют второй закон. Согласно этому закону, при смешивании цветов, находящихся в спектре ближе друг к другу, чем дополнительные, возникает цвет, по своему тону промежуточный между ними. Проверку ведут смешивая: а) красный и желтый, б) синий и зеленый, в) фиолетовый и зеленый, г) красный и фиолетовый.
Положительные последовательные образы. 1. В затемненной комнате на мгновение зажигают электрическую лампу, на которую смотрит испытуемый. Ее образ сохраняется у человека некоторое время и после выключения света.
2. Проделывают то же, что и в предыдущем случае, взяв лампу, окрашенную в какой-либо цвет. Последовательный образ возникает того же цвета, что и лампочка.
3. В затемненной комнате зажигают спичку, дают ей несколько обгореть, а затем гасят пламя.
Противоположный эффект получают, если вначале смотреть на черный круг на белом фоне.
3. Испытуемый фиксирует взглядом крестик в центре темного круга со светлым ободком, затем смотрит на белый круг,
5. Объясняют отрицательные последовательные образы для ахроматических и хроматических цветов с точки зрения трехком-понентной теории цветного зрения.
фиксируя также крестик в центре его (рис. 154). Последовательный образ возникает в виде светлого круга с темным ободком внутри.
В задачу работы входит установление порога обонятельного раздражения по Эльсбергу — Лев и.
Подготовка опыта. 1. Берут бутыль емкостью в 1 л (рис. 159). Вставляют в нее пробку, через которую проводят две стеклянные трубки. Одна доходит почти до дна, другая заканчивается
немного ниже горлышка бутылки. При помощи резиновых трубок первую соединяют со шприцем, а вторую с раздвоенной трубкой, концы которой в виде олив служат для введения в ноздри испытуемого.
Поскольку большинство использованных в 1976 г. антибиотиков-было выбрано для первичного изучения совершенно случайно, то вполне вероятно, что основную часть пригодных соединений предстоит еще открыть. Одна из главных проблем состоит в том, чтобы увеличить ассигнования на поиск новых микробных метаболитов и получение производных и аналогов соединений с известной активностью и недостатками.
Скорость старения лекарств считается выше 10%, т.
), способствующие отбору антибиотиков, разработке способов их получения и оценки. При выполнении коротких программ услуги этих служб могут оказаться менее выгодными, чем организация работы: в собственных лабораториях на производстве. При длительных исследованиях эти службы освобождают от необходимости проводить техническую экспертизу, тогда как при кратковременной программе они позволяют быстро решить ряд проблем;
5) в настоящее время при решении практических задач большой интерес представляют успехи молекулярной биологии, достигнутые при изучении механизмов действия антибиотиков.
Тот факт, что К+-формы бактерий чаще всего обнаруживают в больничных палатах, а также на фермах, использующих корма с добавлением медикаментов, и в то же время в значительно меньшей степени в других местах, также согласуется с этим мнением».
Этим двум мнениям противоречат статьи, опубликованные в последнее время, например работа Бонадонна и др. [34], в которой описан успех при лечении рака молочной железы с применением комплекса лекарств (циклофосфамида, 5-фторурацилла и .
Хорошим примером в
этом плане являются цефалоспорины — важная группа антибиотиков, основным недостатком которых является чувствительность наиболее активных из них к разрушающему действию ферментов эитеропатогенных бактерий. Защита этих антибиотиков от деградации ферментами будет, конечно, способствовать сохранению присущей им активности и значительно увеличит терапевтический потенциал. Одна из возможностей обеспечения такой защиты состоит в одновременном действии на бактерии и других р-лактамных антибиотиков, которые характеризуются значительно большим сродством к разрушающему их ферменту; например, использование против Pseudomonas высоких концентраций клоксациллина, который сам по себе неактивен против этих бактерий, но обладает очень высоким сродством к р-лактамазе Pseudomonas.
Если курс лечения цефалоспорииом сопровождать одновременным введением эффективного ингибитора р-лактамазы, то отмечается очень заметное усиление антибактериального действия [3]. В качестве ингибиторов р-лактамаз уже исследован ряд веществ. Однако по ряду причин в настоящее время эти вещества пока не начали использовать в терапии, поэтому остается очень широкое поле для дальнейших поисков, которые могут продолжаться до тех пор, пока существуют высокорезистентные возбудители инфекций мочевого тракта.
Поскольку протопласты лишены клеточной стенки, то они нечувствительны к действию пенициллина. Если в последующем концентрация пенициллина снижается ниже ингибирующего уровня, то сферопласты вновь синтезируют •свою клеточную стенку, размножаются и благодаря этому вызовут усиление и рецидив заболевания. В своем естественном состоянии простейшие нечувствительны к таким антибиотикам, как эритромицин, так как пути к месту его действия на рибосомах бактериальной клетки блокированы клеточной стенкой энтеробактерии.